วิตามินดีเป็นวิตามินและเป็นฮอร์โมนสเตียรอยด์ โดยส่วนใหญ่ประกอบด้วย VD2 และ VD3 ซึ่งมีโครงสร้างคล้ายกันมาก วิตามิน D3 และ D2 จะถูกแปลงเป็นวิตามินดี 25 ไฮดรอกซิล (รวมถึง 25-dihydroxyl วิตามิน D3 และ D2) 25-(OH) VD ในร่างกายมนุษย์ มีโครงสร้างที่เสถียร มีความเข้มข้นสูง 25-(OH) VD สะท้อนถึงปริมาณวิตามินดีทั้งหมด และความสามารถในการแปลงของวิตามินดี ดังนั้น 25-(OH)VD จึงถือเป็นตัวบ่งชี้ที่ดีที่สุดในการประเมินระดับวิตามินดี ชุดตรวจวินิจฉัยนี้ใช้อิมมูโนโครมาโทกราฟี และสามารถให้ผลได้ภายใน 15 นาที